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解析!多肽分離色譜柱的分離原理及作用機(jī)理

更新時(shí)間:2022-12-26      點(diǎn)擊次數(shù):1139
  多肽分離色譜柱適用于分析蛋白質(zhì)多肽等生化樣品。它柱效高,柱壓低,經(jīng)久耐用,代表性地反映了對(duì)產(chǎn)品生產(chǎn)過(guò)程的分步嚴(yán)格控制。且所選擇的硅膠是經(jīng)過(guò)嚴(yán)格質(zhì)量監(jiān)測(cè)的合格產(chǎn)品,粒度分布窄,顆粒表面均勻光滑,因而色譜柱柱效高,柱壓卻很低,并進(jìn)一步延長(zhǎng)了其使用壽命。
 

 

  多肽分離色譜柱的分離原理:
  采用反相流動(dòng)相體系,而按照正相順序出峰。通過(guò)親水性相互作用,可有效的分離反相色譜柱中因保留能力弱而難分離的強(qiáng)極性化合物。是一種分離機(jī)理,而具備這種分離機(jī)理的鍵合相種類非常多。在HILIC中,固定相是極性的,流動(dòng)相中的水相部分表現(xiàn)為強(qiáng)洗脫溶劑,這與傳統(tǒng)的反相色譜法*相反。
 
  作用機(jī)理:
  可以被認(rèn)為是反相液相色譜通過(guò)采用極性固定相來(lái)運(yùn)行的。采用的流動(dòng)相是含有少量水/緩沖鹽或其他極性溶劑的高比例有機(jī)相。流動(dòng)相中的水形成一個(gè)富水層被吸附在固定相表面,極性物質(zhì)首先進(jìn)入富水層得到保留。極性化合物是通過(guò)一個(gè)復(fù)雜的混合模式被保留的,包括:富水層和流動(dòng)相之間的親水分配、極性官能團(tuán)和固定相間的氫鍵作用以及離子官能團(tuán)的靜電作用。當(dāng)然,親水分配是主要的保留模式。從保留機(jī)理來(lái)看,HILIC和反相色譜柱是有著非常大的差別的。
 
  多肽分離色譜柱的優(yōu)勢(shì)及應(yīng)用:
  1、適合快速分離;
  2、峰容量高;
  3、用于分子量<20KDa的蛋白、多肽;
  4、UHPLC和HPLC兼容;
  5、耐用、性能可靠。
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